Скидка на подшипники из наличия!
Уже доступен
Микробиологический контроль на асептическом производстве представляет собой комплексную систему мониторинга, направленную на обеспечение стерильности фармацевтических препаратов. Данная система является критически важным компонентом обеспечения качества стерильных лекарственных средств. Согласно МУК 4.2.734-99 и актуализированному EU GMP Annex 1 от 2022 года, основной целью программы оценки микробиологического состояния производственной среды является постоянная гарантия стабильности асептических условий производства, выявление начальных отклонений и выработка корректирующих действий до возникновения ситуаций, приводящих к появлению нестерильной продукции.
Критические контрольные точки представляют собой специально определенные места в производственной среде, где проводится систематический отбор проб для микробиологического анализа. Выбор точек отбора проб базируется на нескольких ключевых принципах, обеспечивающих репрезентативность собираемых данных и эффективность программы контроля.
Критические поверхности определяются как поверхности, находящиеся в зоне выполнения асептических операций, непосредственно контактирующие со стерильным материалом, емкостями или инструментарием. К критическим производственным зонам относятся производственные зоны, в которых стерильный продукт, компоненты первичной упаковки подвергаются воздействию окружающей производственной среды.
Программа микробиологического мониторинга окружающей среды в асептических производственных зонах охватывает оценку бактериальной контаминации воздуха, критических поверхностей, рук и одежды персонала, работающих в асептических производственных зонах, оценку эффективности очистки и дезинфекции помещений и оборудования, тестирование активности дезинфектантов, оценку эффективности работы стерилизующих воздушных фильтров и качества стерилизации.
В асептической зоне розлива на площади 20 квадратных метров устанавливаются следующие критические точки: область непосредственно над открытыми флаконами в зоне Grade A, поверхности конвейера транспортировки открытых емкостей, зона передачи материалов между Grade B и Grade A, участки вблизи персонала, выполняющего критические операции. Карта микробной контаминации, полученная при аттестации чистого помещения, выявляет точки наибольшего бактериального загрязнения и служит основой для составления плана отбора проб при текущем контроле.
Методы отбора проб для микробиологического анализа подразделяются на активные и пассивные. Каждый метод имеет свои преимущества, ограничения и специфические области применения в асептическом производстве.
Активный отбор воздуха использует специальные пробоотборники, которые принудительно прокачивают определенный объем воздуха через или над питательной средой, обеспечивая количественное определение микробной контаминации в колониеобразующих единицах на кубический метр.
Метод импакции является наиболее распространенным активным методом. При этом методе воздух направляется через потоковую систему, где микроорганизмы ударяются о питательную среду и остаются на ней для дальнейшего культивирования и анализа. Данный метод позволяет точно контролировать объем отбираемого воздуха и обеспечивает количественное определение микробиологической контаминации. В зоне Grade A используется пробоотборник воздуха, откалиброванный для отбора 1000 литров воздуха. Воздух проходит через перфорированную пластину, ударяясь о поверхность агара в чашке Петри.
Метод фильтрации основан на пропускании определенного объема воздуха через мембранный фильтр, который затем переносится на питательную среду для культивирования уловленных микроорганизмов. Количество пропущенного воздуха должно составлять 100 кубических дециметров для определения общего количества микроорганизмов, дрожжевых и плесневых грибов и 250 кубических дециметров для определения золотистого стафилококка.
Пассивный отбор основан на естественной седиментации микроорганизмов на открытые чашки Петри и отражает общий микробиологический фон помещения. Метод седиментации заключается в определении микробных частиц, оседающих на поверхность чашек Петри с агаром. Он не дает количественной характеристики обсемененности воздуха и служит дополнением к другим методам отбора проб, так как на чашки Петри оседают лишь частицы большого размера, в то время как мелкие частицы остаются взвешенными в воздухе.
Для контроля поверхностей применяются методы смывов с использованием стерильных тампонов, контактных чашек Родека и отпечатков. Отбор проб с поверхности перчаток и с других участков одежды выполняется для каждого оператора сразу после выполнения им критических технологических операций для каждой произведенной серии продукта. В закрытых помещениях точки отбора проб устанавливаются из расчета на каждые 20 квадратных метров площади одна проба воздуха, по типу конверта: четыре точки по углам комнаты на расстоянии 0,5 метра от стен и пятая точка в центре.
После отбора проб материал подлежит посеву на питательные среды и последующему культивированию для выявления и подсчета жизнеспособных микроорганизмов. Выбор питательной среды и условий инкубации определяется целями исследования и типом контролируемых микроорганизмов.
Питательные среды являются основой микробиологического контроля на фармацевтических предприятиях. Выбор подходящей среды зависит от цели анализа, типа микроорганизмов и требований регуляторных стандартов.
Эти среды предназначены для выращивания широкого спектра микроорганизмов и используются для общего контроля микробиологической чистоты. Триптиказеино-соевый агар (TSA) представляет собой универсальную среду для аэробных бактерий и грибов, применяется для контроля воздуха, поверхностей и персонала. Сабуро-декстрозный агар (SDA) используется для культивирования грибов и дрожжей, часто применяется при тестировании стерильности.
Для определения наличия золотистого стафилококка забор проб проводят на желточно-солевые среды на основе элективно-солевого агара, стафилококк-агара, маннитол-агара или среды номер 10 по Государственной Фармакопее, агара Байрд-Паркер. Для идентификации конкретных видов микроорганизмов используются диагностические и селективные питательные среды, биохимические тесты и экспресс-тесты.
После инкубации при температуре 30-35 градусов Цельсия в течение трех-пяти дней подсчитывается количество колониеобразующих единиц, которое пересчитывается на кубический метр воздуха для сравнения с нормативами. Посевы инкубируют при температуре 37 градусов Цельсия в течение 48 часов, подсчитывают количество выросших колоний и производят перерасчет на один кубический метр воздуха.
Формула расчета:
Количество КОЕ/м³ = (Количество колоний × 1000) / Объем отобранного воздуха (л)
Пример расчета:
При отборе 100 литров воздуха на чашке Петри выросло 3 колонии микроорганизмов.
Расчет: (3 × 1000) / 100 = 30 КОЕ/м³
Полученное значение сравнивается с установленными нормативами для соответствующего класса чистоты помещения.
В последние годы появились новые ускоренные методы микробиологического контроля, основной целью которых является сокращение времени проведения анализа и снижение трудоемкости процесса. Экспресс-методы позволяют получать результаты в течение нескольких минут или часов вместо традиционных трех-семи суток.
Метод АТФ-биолюминесценции основан на определении аденозинтрифосфата, который содержится во всех живых клетках растительных, животных и клетках микроорганизмов. АТФ является интегральным показателем чистоты. Люминометр детектирует интенсивность излучения, возникающего в ходе реакции биолюминесценции, которая прямо пропорциональна количеству АТФ. Люминометр выдает результат в течение одной минуты, что дает возможность внести коррективы перед пуском производственной линии, то есть работать в режиме реального времени.
АТФ-биолюминесценция для контроля гигиенического состояния поверхностей в настоящее время широко применяется в промышленности. Доступность относительно недорогих, портативных и простых в использовании люминометров позволяет многим производителям внедрять методы экспресс-тестирования гигиенического состояния, идеальные для контроля в рамках системы ХАССП, где гигиеническое состояние поверхности является критической контрольной точкой.
Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) обнаруживает в пробе генетический материал в виде искомого фрагмента ДНК или РНК и многократно его умножает. Результаты анализов методом ПЦР в большинстве случаев доступны в течение одного-трех дней. Важно помнить, что метод ПЦР не оценивает жизнеспособность обнаруженных в пробе микроорганизмов, что существенно отличает его от посева. Микробиологическая лаборатория выращивает жизнеспособные микробы на питательных средах и может определять чувствительность выросшего микроорганизма к антибиотикам, в то время как ПЦР-исследование может выявить как живые, так и погибшие в результате лечения микроорганизмы.
В целях модернизации и совершенствования микробиологических методов контроля разработаны усовершенствованные методы количественного подсчета микроорганизмов. Применение готовых тест-систем представляет собой инновационный подход к решению проблем, связанных с проведением больших количеств микробиологических анализов. Микробиологические экспресс-тесты предназначены для качественного и количественного определения микроорганизмов. Исследовать с помощью экспресс-тестов возможно различные среды, субстраты, смывы с поверхностей, рук персонала, сырья и продуктов.
Нормативы микробиологической чистоты устанавливаются в соответствии с классом чистоты помещений и характером выполняемых операций. Основными регуляторными документами являются МУК 4.2.734-99 и обновленная версия EU GMP Annex 1 от августа 2022 года.
Обновленная версия Annex 1 от 2022 года расширилась с 16 до 59 страниц и теперь содержит усиленный фокус на управление рисками и наличие стратегии контроля контаминации. Ранее пределы микробной контаминации указывали среднее значение менее одной КОЕ. В версии Annex 1 от 2022 года предел составляет ноль. Пересмотренная версия Annex 1 устанавливает максимальный предел действия для контаминации жизнеспособными частицами в зонах Grade A на уровне отсутствие роста, и указывает, что любой рост должен привести к расследованию.
Уровень тревоги представляет собой установленный докритический уровень содержания микробов или механических частиц, дающий раннее предупреждение о возможном отклонении от нормальных рабочих условий производства, не требующий немедленного вмешательства и исправляющих действий, но который является поводом для проведения дополнительных контролей. Программа корректирующих мероприятий при превышении установленного уровня действия должна быть разработана каждым производителем индивидуально, с учетом конкретных производственных условий, документально оформлена.
Рекомендуется собирать данные минимум за период от шести до двенадцати месяцев из каждой точки отбора проб для статистически обоснованного установления пределов.
Формулы расчета:
Предел тревоги = Среднее значение + 2 × Стандартное отклонение
Предел действия = Среднее значение + 3 × Стандартное отклонение
Пример расчета для зоны Grade B:
При среднем значении 2 КОЕ на седиментационной пластине и стандартном отклонении 1 КОЕ:
Предел тревоги = 2 + 2(1) = 4 КОЕ
Предел действия = 2 + 3(1) = 5 КОЕ
Согласно EU GMP Annex 1 от 2022 года, требования к частоте мониторинга были существенно ужесточены, особенно для критических зон Grade A, где теперь требуется непрерывный мониторинг жизнеспособных частиц. Это изменение подчеркивает важность постоянного контроля микробиологического состояния в наиболее критических зонах производства. Частота мониторинга не является фиксированной величиной и подлежит корректировке в зависимости от обстоятельств.
Расследование микробиологических отклонений является критически важным процессом обеспечения качества, направленным на выявление причин несоответствий и предотвращение их повторного возникновения. Любое отклонение от установленных нормативов требует немедленного реагирования и тщательного анализа.
При обнаружении превышения установленных уровней загрязнения или проявления неблагоприятной тенденции загрязнения в кратчайшие сроки проводится расследование. В случаях, когда истинная основная причина несоответствия не может быть установлена, следует идентифицировать наиболее вероятную причину. В случаях, когда в качестве причины подозревается или идентифицирована ошибка персонала, это должно быть доказано с особой тщательностью, чтобы гарантировать, что не были пропущены существующие процессные, процедурные или системные ошибки или проблемы.
По результатам расследования должны быть определены и предприняты соответствующие корректирующие и предупреждающие действия. Корректирующие действия при обнаружении у операторов превышения установленных уровней загрязнения включают увеличение частоты отбора проб, усиление наблюдения и контроля, проверку правильности переодевания персонала и проведение повторной подготовки персонала.
При обнаружении роста 5 КОЕ золотистого стафилококка на отпечатке перчатки оператора в зоне Grade A было проведено расследование. Выявлено нарушение техники асептического переодевания. Проведены следующие корректирующие действия: повторное обучение всего персонала асептическим производственным зонам, модификация процедуры гигиены рук с добавлением контроля эффективности дезинфекции, внедрение ежедневного микробиологического контроля перчаток всех операторов в течение двух недель, пересмотр квалификации персонала с проведением повторной аттестации.
Правильно составленная документация является важнейшей частью системы обеспечения качества на фармацевтическом производстве. Документация микробиологического контроля должна обеспечивать полную прослеживаемость всех этапов мониторинга, от отбора проб до принятия решений по результатам.
План отбора проб представляет собой документ, описывающий методику отбора проб в контролируемой среде, устанавливающий точки отбора проб, частоту и количество регулярно проводимых исследований, методы анализа данных и интерпретацию полученных результатов. В процессе производства следует составлять протоколы, документально подтверждающие фактическое проведение предусмотренных инструкциями технологических стадий и получение продукции требуемого качества в количестве, соответствующем установленным нормам.
Должно быть обеспечено составление протоколов, подтверждающих фактическое проведение всех необходимых отборов проб, проверок и испытаний, а также регистрацию любых отклонений и расследований в полном объеме. Каждую отобранную лабораторную пробу маркируют этикетками с указанием наименования продукта, предприятия-изготовителя, номера партии, даты отбора проб с указанием часа отбора проб, цели микробиологического испытания.
Вы можете задать любой вопрос на тему нашей продукции или работы нашего сайта.